胶原判断制剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人I型胶原蛋白(COL-1)抗体透明酶标包被板中,
温育足够时间后,
洗涤除去未结合的成分,
再加入酶标工作液,
温育足够时间后,
洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,
底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,
在酸的作用下变成黄色,
颜色的深浅与样品中人I型胶原蛋白(COL-1)浓度呈正相关,
450nm波长下测定OD值,
根据标准品和样品的OD值,
计算样本中人I型胶原蛋白(COL-1)含量。
胶原检测试剂盒的操作步骤：
1、准备：从冰箱取出试剂盒,
室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板,
固定于框架上,
分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,
记录各孔位置,
在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL,
再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；标准品和待测样本孔均再加酶标工作液50μL；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、洗板：弃去液体,
吸水纸上拍干,
每孔加满洗涤液,
静置1min,
甩去洗涤液,
吸水纸上拍干,
如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、显色：每孔先加入显色剂A液50μL,
再加入显色剂B液50μL,
37℃避光显色15min。
7、终止：取出酶标板,
每孔加终止液50μL,
终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白孔调零,
在终止后15分钟内,
用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
9、折算的：按照规则品的渗透压及分属的OD值,
折算的出规则申请这类卡种曲线提额的切线重返式子,
再按照样本量的OD值,
在重返式子上折算的出分属的原辅料渗透压,
也可食用各种各样的用途工具来折算的。终于渗透压为实计测试渗透压乘于摇匀度数。
