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你知道使用胶原检测试剂盒的操作步骤吗

点频率:95更新时长:2021-01-14
 
  胶原判断制剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人I型胶原蛋白(COL-1)抗体透明酶标包被板中, 温育足够时间后, 洗涤除去未结合的成分, 再加入酶标工作液, 温育足够时间后, 洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B, 底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物, 在酸的作用下变成黄色, 颜色的深浅与样品中人I型胶原蛋白(COL-1)浓度呈正相关, 450nm波长下测定OD值, 根据标准品和样品的OD值, 计算样本中人I型胶原蛋白(COL-1)含量。
 
  胶原检测试剂盒的操作步骤:
 
  1、准备:从冰箱取出试剂盒, 室温复温平衡30分钟。
 
  2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
 
  3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板, 固定于框架上, 分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔, 记录各孔位置, 在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL, 再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);标准品和待测样本孔均再加酶标工作液50μL;空白对照孔不加。
 
  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
 
  5、洗板:弃去液体, 吸水纸上拍干, 每孔加满洗涤液, 静置1min, 甩去洗涤液, 吸水纸上拍干, 如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
 
  6、显色:每孔先加入显色剂A液50μL, 再加入显色剂B液50μL, 37℃避光显色15min。
 
  7、终止:取出酶标板, 每孔加终止液50μL, 终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
 
  8、测定:以空白孔调零, 在终止后15分钟内, 用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
 
  9、折算的:按照规则品的渗透压及分属的OD值, 折算的出规则申请这类卡种曲线提额的切线重返式子, 再按照样本量的OD值, 在重返式子上折算的出分属的原辅料渗透压, 也可食用各种各样的用途工具来折算的。终于渗透压为实计测试渗透压乘于摇匀度数。
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