人原钙黏素1（PCDH1）ELISA检测试剂盒（酶联免疫性吸咐试验报告法）实用就维修手册
仅限于教育科研實驗理论研究应用,
请勿广泛用于临床实验的诊断!
l本生化试剂盒采用离体化学发光法的检测血清、血浆、机构匀浆及相关的介质范本中人原钙黏素1（PCDH1）ELISA检测试剂盒
l有效期：6三个月
l保存条件：2-8℃
[进行实验原里]
化学制剂盒运用双抗原一歩夹心法酶联免役吸试验台（ELISA）。往及时包被人原钙黏素1（PCDH1）捕捉到抗体阳性的包被微孔板中,
从左到右倒入疟原虫、标准的品、HRP标记的检测抗体,
经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,
TMB在过氧化反应物酶的促使下转换成浅蓝色,
并在酸的意义下转换成不可能的黄色的。顏色的深度和仿品中的 人原钙黏素1（PCDH1）呈正相应。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值）,
算试样浓度值。
[范例治理 及条件]
1. 血清：将征集于血清溶合管的全血动物标本在空调温度放在2小时内或4℃住宿,
最꧑后1000×g离心分离20 秒钟,
取💯上清既可以,
或将上清放置-20℃或-80℃永久保存,
但应禁止反反复复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素有所作为抗凝剂提取样本采集工具,
并将样本采集工具在提取后的3015🐼分钟内于2-8℃ 1000×g离心式15多分钟,
取上清就可以了查重,
或将上清放置到-20℃或-80℃手机截图,
但应规避经常冻融。
3. 安排匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)清洗道路安排,
除掉留下血液循环系统（匀浆中裂解的红内部会影响到测定的结果）,
测重后将安排剪碎。将剪碎的安排与对照体积计算的PBS（通常按1:9的总重量体型比,
例如1g的策划 样板各自9mL的PBS,
关键面积可会按照实践需要合适的修正,
并做记录卡。高性价比在PBS中放入球蛋白酶抑制性剂）添加窗户玻璃匀浆器中,
于冰上运动足够精磨。为了让进十步裂解聚集人体细胞,
能否对匀吸收塔通🐻过超声心动图漏沙,
或重复冻融。结果将匀吸收塔于5000×g离心力5~101分钟,
取上清探测。
4. 内部培养计划物上清或别的菌物疟原虫：请1000×g꧃离心式20分种,
取上清即刻𝐆测试,
或将上清放置到-20℃或-80℃保存文档,
但应减少频繁冻融。
注：组织切片采集溶血会损害另外探测结局,
𒈔所以溶血组织切片采集为宜对其进行该类探测。
[是需要而未带来了的化学药品和器械]
1.酶标仪（450nm）
2.高控制精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温恒湿箱
4.减压纯净水或去阳离子水
[化学试剂盒组成部分]
提示：
1. 标准的品质量浓度按序为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL
2. 途经很多正确生物组织切片测试,
生物组织切片的正确密度值均🤡在化学试剂盒提供数据的论文检测时间范围内,
实验性操作过程中直接性取50μL样版上样可以了。当有大部分样版值以上标准规定品酸度时,
都可以样版直接摇匀就可以液将标本采集采取应当直接摇匀就可以后再采取科学实验。
[需要注意事宜]
1）化学药品应按性子说书处理,
安全使用前灰复到温度。稀稀后后的标准单位品应丢掉⛦🐼,
必不可保留。
2）工作中无需的板条应及时放回标签印刷袋中,
密封带保管,
以防变质。
3）不一样的另外免疫微生物𒊎培养基应彩盒好或盖好。各种批号ﷺ的免疫微生物培养基不想混用。质保前用到。
4）应用一起性的吸头以♕防交叉重合影响,
产生中断液和底物A、B液时,
以免利用带不锈钢地方๊的加样器。
5）在运行乾净的材料容器设计手机配置干洗液。在运行前彻底混匀生化试剂盒里的不同气体及样本ꦅ。
6）干洗酶标板前应充足拍干,
不要再将吸湿纸真接放上酶标反应迟钝孔中吸湿。
7）底物A应蒸发,
不要♑长事件另存盖子♉。底物B对光比较敏感,
制止长用时暴露自己于光下。制止用手掌排斥,
无毒。调查来完成后应会读出OD值。
8）注入采血管的先后应一直,
以保持那些影响板孔温育的时期这样。
9）遵照证明书里表示的日子、加液的量及顺寻来进行温育运营。
[实验试剂预备]
化学试剂盒从冷藏库的环境中导出来应在室内温度和平后才可以用。
20×干洗减慢液的稀释溶解：分馏水按1：20稀释溶解,
ꦯ即1份20×洗涤剂抗震液加19份水蒸ꦬ气去离子水。
[操控工作步骤]
1）操作前,
将一切化学药品𝔍有效充分的混匀。别使液状体呈现广泛的泡末,
否则加样时填加广泛的强力气泡,
呈现加样上🔥的误差度。
2）给出待测样件总个数上加规格品的总个数决定的营养的板条数。一个规格品和空缺孔可以做复孔。一个ဣ样件给出你的总个数来决定,
能选用复孔的尽可能做复孔。生物标本采集用生物标本采集直接稀释就可以液1：1就稀释后假如50ul于反應孔内。
3）建立溶解稀释好后的原则品50ul于现象孔、注入待测产品的样品50ul于反應孔内。随时申请加入50ul的动物素标记符号的表面抗原。扣上膜板ꦕ,
用适当的力度轻轻自由振荡混匀,
37℃温育1小的时候。
4）甩去孔内液,
每孔点满洗涤剂液,
振动30秒,
甩去干洗液,
用吸水性纸拍干。相似此进行3次。一旦用洗板机洗洁𒁏,
洗洁机会曾加次。
5）每孔加进80ul的亲和链酶素-HRP,
用适当的力度轻轻震荡混匀,
37℃温育𝕴30min。
6）甩去孔内透明液体,
每孔加够洗滌液,
自由振荡30秒,
甩去洗涤剂液,
用吸水能力纸拍干。反复重复此使用3次ꦓ。倘若用洗板机洗衣机清洗,
洗🍒衣机清洗每一下增添一下。
7）每🍒孔申请加入底物A、B各50ul,
悄悄的自由振荡混匀,
37℃温育10分钟左右。杜绝照明。
8）掏出酶标板,
快速发展建立5🐬0ul暂停液,
注入暂停液后应即时法测然而。
9）在450nm光波长处测定法各孔的OD值。
[检测成果计算出]
以被测规则品的OD数数值横地🐭图大地地图坐标,
规范规范品的盐浓度数数值纵地图大地地图坐标,
在地图大地地图坐标白纸或用相关联pc软件建模规范规范斜率,
并获得双曲线复出方程式,
将土样的OD值代入方程式,
测算出试样的浓度值。
[化学制剂盒性]
1. 检侧範圍：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。
2. 精确度度：检查测量浓度值低于0.1 ng/mL。
3. 非特异朋友：不与其他一些可溶解性结构设计相似物交错的反应。
4. 相同性：板内突变指数公式值为10% ,
板间遗传变异标准值值为15% 。
